《上海交通大学学报》(农业科学版)

作者	单位	E-mail
罗依然	上海交通大学农业与生物学院/上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240	332187944@qq.com
周书亭	上海交通大学农业与生物学院/上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240
杨亮	上海交通大学农业与生物学院/上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240
刘源平	上海交通大学农业与生物学院/上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240
蒋升瑶	上海交通大学农业与生物学院/上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240
叶力波利·达吾力	上海交通大学农业与生物学院/上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240
王子泓	上海交通大学农业与生物学院/上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240
罗渝宵	上海交通大学农业与生物学院/上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240
邹霭萱	上海交通大学农业与生物学院/上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240
崔立	上海交通大学农业与生物学院/上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240
杨志彪	上海交通大学农业与生物学院/上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240

基金项目:国家重点研发计划(2016YFD0500100);上海市科技兴农项目[沪农科推字(2017)第1-11号];国家自然科学基金(31472211)

中文摘要:为了观察与猪流行性腹泻病毒(PEDV) NSP12互作蛋白乳酸脱氢酶B (LDHB)的体外表达情况和小RNA干扰效果,构建了真核表达载体pcDNA4.0-LDHB-3*Flag,并在Vero细胞中过表达LDHB,发现在37 kDa处有大小相符的明显条带。设计的2条小干扰RNA能降低LLC-PK1细胞中LDHB的mRNA和蛋白质水平,经one-way ANOVA检验证明干扰实验组2-ΔΔct的平均值显著低于对照组(P<0.05)。该结果为研究LDHB在PEDV感染LLC-PK1和Vero细胞过程中的作用提供了基础数据。

中文关键词:LDHB 真核表达小RNA干扰

In vitro expression of LDHB in LLC-PK1 cells and its sRNA interfering

Abstract:In order to observe the in-vitro expression of LDHB interacting with PEDV NSP12 and the efficiency of the small interfering RNA,a eukaryotic expression vector named pcDNA4.0-LDHB-3*Flag was constructed to over-express LDHB in Vero cells,and a matching protein band was detected at 37kDa.The mRNA and protein levels of LDHB were significantly down-regulated in LLC-PK1 cells after interfered by two small RNAs.One-way ANOVA test showed the mean of 2-ΔΔct of experiment groups was substantially below the control groups (P<0.05).This result provided a basis for the functional analysis of LDHB in the process of PEDV infecting LLC-PK1 and Vero cells.

keywords:LDHB eukaryotic expression small interfering RNA

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