LLC-PK1细胞中LDHB蛋白的体外表达及小RNA干扰
投稿时间:2019-09-09  修订日期:2019-11-21  点此下载全文
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罗依然 上海交通大学 农业与生物学院 bujizhaomu@qq.com 
周书亭 上海交通大学 农业与生物学院  
刘源平 上海交通大学 农业与生物学院  
杨亮 上海交通大学 农业与生物学院  
蒋升瑶 上海交通大学 农业与生物学院  
叶力波利.达吾力 上海交通大学 农业与生物学院  
杨志彪 上海交通大学 农业与生物学院 zbyang@sjtu.edu.cn 
基金项目:国家重点研发计划(2016YFD0500100);国家自然科学基金(31472211)
中文摘要:为了观察与猪流行性腹泻病毒(PEDV)NSP12互作蛋白乳酸脱氢酶B(LDHB)的体外表达情况和小RNA干扰效果,构建了真核表达载体pcDNA4.0-LDHB-3*Flag,并在Vero中过表达LDHB,发现在37kDa处有大小相符的明显条带。设计的两条小干扰RNA能降低LLC-PK1中LDHB的mRNA和蛋白质水平,经one-way ANOVA检验证明干扰实验组2-ΔΔct的平均值显著低于对照组(P<0.05)。该结果为研究LDHB在PEDV感染LLC-PK1和Vero细胞过程中的作用提供了基础数据。
中文关键词:LDHB  真核表达  小RNA干扰
 
In vitro expression of LDHB in LLC-PK1 cells and its sRNA interfering
Abstract:In order to observe the in-vitro expression of LDHB interacting with PEDV NSP12 and the efficiency of the small interfering RNA, a eukaryotic expression vector named pcDNA4.0-LDHB-3*Flag was constructed to over-express LDHB in Vero cells, and a matching protein band was detected at 37kDa. The mRNA and protein levels of LDHB were significantly down-regulated in LLC-PK1 after interfered by two small RNAs. One-way ANOVA test showed the mean of 2-ΔΔct of experiment groups was substantially below the control groups (P<0.05). This result provided a basis for the functional analysis of LDHB in the process of PEDV infecting LLC-PK1 and Vero cells.
keywords:LDHB  Eukaryotic expression  Small interfering RNA
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